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核酸相关>反转录与PCR>PCR相关 (DNA聚合酶)DNA Polymerase

  • 产品编号: HKM64

  • 产品分类:微生物试剂

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产品名称:核酸相关>反转录与PCR>PCR相关 (DNA聚合酶)DNA Polymerase
 
产品简介:DNA Polymerase是一种仅当温度高于45℃时才具有DNA聚合酶活性的Taq DNA Polymerase(简称Taq酶)与其可逆抑制剂的混合物,俗称热启动Taq酶或HS Taq酶。使用本产品进行PCR反应时可以在室温操作,并能有效避免室温操作时由于普通Taq酶或其它耐热DNA聚合酶存在活性而导致的非特异性PCR背景。
 DNA Polymerase是Taq酶与其可逆性抑制剂的混合物。该抑制剂可以可逆性地结合于Taq酶活性位点,当温度低于45℃时,形成非活性的Taq酶和抑制剂的复合物,从而抑制了Taq酶的活性。在常规PCR反应过程中,当温度升高至45℃或以上时,Taq酶和其可逆性抑制剂解离,从而发挥其正常的DNA聚合酶活性。上述机制使DNA
Polymerase仅在加热到45℃或以上时才会有酶活性,从而确保了小于45℃时不会发生非特异性的DNA聚合反应,有效降低了PCR的非特异性背景,提高了PCR反应的准确性和精确性。
常规的DNA分离纯化操作,例如PCR纯化试剂盒或DNA凝胶回收试剂盒和乙醇沉淀等操作,都能有效去除本产品中的抑制剂,以避免可能的对于后续反应的干扰。
DNA Polymerase使用时无需额外的高温孵育步骤以释放Taq酶活性。
DNA Polymerase和普通的Taq DNA Polymerase一样,可以催化5'至3'方向的依赖于DNA模板的DNA的聚合反应,没有3'至5'的外切酶活性,最终会导致PCR产物的3'末端产生3'-dA overhangs,即产生带一个A的3'粘端,可直接用于TA克隆。

来源:本产品使用的Taq DNA Polymerase为recombinant Taq DNA Polymerase,通过大肠杆菌表达纯化获得,和纯化获得的天然Taq DNA Polymerase在各方面的性质相同。
用途:高背景和有非特异性条带的PCR,高专一性PCR(high-specificity PCR),高灵敏度PCR,生物芯片分析(microarray
analysis),常规PCR,克隆PCR、TA克隆等,不建议用于荧光定量PCR (qPCR)。
活性定义:One unit of the enzyme catalyzes the incorporation of 10 nmol of deoxyribonucleotides into a
polynucleotide fraction (adsorbed on DE-81) in 30 min at 70℃. Enzyme activity is assayed in the following mixture: 67
mM Tris-HCl (pH 8.8 at 25℃), 6.7 mM MgCl2, 1 mM 2-mercaptoethanol, 50 mM NaCl, 0.1 mg/ml BSA, 0.75 mM
activated calf thymus DNA, 0.2 mM of each dNTP, 0.4 MBq/ml [3H]dTTP。
纯度:不含DNA内切酶、外切酶和磷酸酯酶,不含RNA酶,满足常规PCR反应要求。
酶储存溶液:20 mM Tris-HCl (pH 8.0), 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 100 mM KCl, 0.5% (v/v) Nonidet P40, 0.5% (v/v)
Tween 20 and 50% (v/v) glycerol。
10X Hot-Start PCR Buffer:100 mM Tris-HCl (pH 8.8 at 25℃), 500 mM KCl, 15mM MgCl2, 0.8% (v/v) Nonidet
P40。
失活或抑制:酚氯仿抽提可以使 DNA Polymerase失活,加入脱氧胆酸钠至0.06%,SDS至0.01%,或
sarkosyl至0.02%均可以抑制DNA Polymerase。
本产品用于50微升的PCR反应体系,足够用于800个反应;用于20微升的PCR反应体系,足够用于2000个反应。

上海化科实验器材有限公司主要生产经营:实验室器材,玻璃仪器,实验室耗材,生物耗材,化学试剂,微生物试剂,样品瓶,包装瓶,实验室设备,仪器仪表等。
广泛服务于:科研,制药,生物,生命科学,教育,污水处理,食品与饮料,电子,轻工业,矿业,石油天然气,石油化学工业,工业品仪器,环保工程等行业。
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