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核酸相关>反转录与PCR>PCR相关 (耐血 DNA聚合酶)

  • 产品编号: HKM77

  • 产品分类:微生物试剂

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产品名称:核酸相关>反转录与PCR>PCR相关 (耐血DNA聚合酶)

产品简介: DNA Polymerase (Blood-resistant),即耐血 DNA聚合酶,是一种经过基因工程改造的非常高效的适用于EDTA、肝素或柠檬酸钠抗凝血样品或干血斑样品直接PCR检测的耐热DNA聚合酶。
对于全血样品可以直接PCR检测,无须提取DNA。本产品对人、小鼠等全血中血红素等各种PCR抑制剂表现出超强的抗性,对于新鲜采集的、4℃保存或低温冻存EDTA、肝素或柠檬酸钠抗凝的人或小鼠血液样品或者干血斑(如whatman903或FTA采血卡上的干血斑),都无需进行DNA提取纯化,可以直接用于PCR扩增目的DNA。
所需血样少,耐血能力高。本产品用于20μl的PCR扩增体系时,通常仅加入约1μl抗凝全血即可顺利完成PCR检测。用于检测细菌、病毒等微生物感染时,为获得最高的检测灵敏度,20μl的PCR扩增体系中最大加入的血液量可以达到4μl,即20%体积,有些类型的抗凝血(例如人肝素抗凝血)最大加入的全血体积可以达到10μl,即50%体积。
兼容EDTA、肝素或柠檬酸钠三种常见抗凝血。血液样品用于PCR检测时,EDTA、肝素或柠檬酸钠抗凝血都可以兼容的。如果希望取得最佳的检测效果,优先推荐EDTA抗凝血。因为EDTA可以螯合多种核酸酶发挥酶活性所必须的金属离子,从而可以更好地抑制核酸的降解。
本产品提供了一对阳性对照引物,便于确认PCR检测效果。该对引物是一种人和小鼠的通用引物,可以扩增人或小鼠基因组DNA中β-actin基因的300bp DNA片段。
本产品的耐血体积百分比可以达到20-50%。本产品用于肝素、柠檬酸钠和EDTA抗凝血PCR检测的效果参考图1。图中可见,本产品对肝素(heparin)、柠檬酸钠和EDTA处理的人全血的耐受体积百分比可以达到50%、20%和30%。对于小鼠全血的PCR检测,本产品可以耐受的体积百分比也不小于20%。综上,本产品用于PCR检测时,推荐的全血的使用量为PCR总体积的1-20%,最优先的推荐用量为5-10%。
本产品扩增获得的PCR产物带有3'-dA overhangs的粘性末端,可直接用于和T载体连接进行TA克隆。
来源:大肠杆菌重组表达纯化获得。
用途:抗凝血样品基因组DNA中目的基因的直接扩增、基因分型(如基因缺失等)、血液样品中细菌、病毒等微生物感染的基因检测,以及基因敲除或转基因小鼠基因型分析。
纯度:不含DNA内切酶、外切酶和磷酸酯酶,不含RNA酶,满足常规PCR反应要求。
酶储存溶液:20 mM Tris-HCl (pH 8.0), 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 100 mM KCl, 0.5% (v/v) Nonidet P40, 0.5% (v/v) Tween 20 and 50% (v/v) glycerol。
失活或抑制:酚氯仿抽提可以使 DNA Polymerase失活。
本产品如果用于50微升的PCR反应体系,两种包装的本产品分别足够用于80个和400个反应;如果用于20微升的PCR反应体系,两种包装的本产品分别足够用于200个和1000个反应。

保存条件:
-20℃保存。
注意事项:
由于PCR反应非常灵敏,在使用 DNA Polymerase时请注意避免微量待扩增DNA的污染,并尽量考虑设置不加模板的空白对照以确认是否有待扩增DNA的污染。
设置PCR反应体系时,抗凝血的推荐用量为PCR体系总体积的5-10%左右,可以直接添加到PCR体系中,无需进行任何额外处理。
PCR反应结束之后,建议3000-5000g离心3-5min以沉淀血细胞碎片,便于吸取上清用于电泳分析等。注意:由于抗凝血本身的原因,PCR结束后在PCR管底部会出现透明凝胶状物质,此为正常现象。

上海化科实验器材有限公司主要生产经营:实验室器材,玻璃仪器,实验室耗材,生物耗材,化学试剂,微生物试剂,样品瓶,包装瓶,实验室设备,仪器仪表等。
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