本PCR试剂盒带有Taq DNA Polymerase、PCR buffer、dNTP和上样缓冲液，自备模板和引物即可进行PCR反应，适合用于普通的PCR或RT-PCR定性或定量检测，也可以用于不太长的的DNA片段的克隆。
Taq DNA Polymerase简称Taq酶或Taq，是最常用的DNA聚合酶之一。
Taq DNA Polymerase是一种来源于嗜热菌Thermus aquaticus的高度热稳定的DNA聚合酶，95℃孵育时的半衰期大于40分钟。Taq酶的分子量为94kDa。Taq酶可以催化5'至3'方向的依赖于DNA模板的脱氧核苷酸的聚合。Taq酶没有3'至5'的外切酶活性，有非常低的5'至3'外切酶活性。由于Taq酶没有3'至5'的外切酶活性，因此在DNA聚合过程中相当于核苷酸转移酶的作用，最终会导致PCR产物的3'末端会产生3'-dA overhangs，即产生带一个A的3'粘端。本Taq DNA Polymerase为recombinant Taq DNA Polymerase，通过大肠杆菌表达纯化获得，和纯化获得的天然Taq DNA Polymerase在各方面的性质相同。
活性定义：One unit of the enzyme catalyzes the incorporation of 10 nmol of deoxyribonucleotides into a
polynucleotide fraction(adsorbed on DE-81) in 30 min at 70℃. Enzyme activity is assayed in the following mixture: 67 mM Tris-HCl(pH 8.8 at 25℃), 6.7 mM MgCl2, 1 mM 2-mercaptoethanol, 50 mM NaCl, 0.1 mg/ml BSA, 0.75 mM activated calf thymus DNA, 0.2 mM of each dNTP, 0.4 MBq/ml [3H]dTTP。
纯度：不含DNA内切酶、外切酶和磷酸酯酶，不含RNA酶，满足常规PCR反应要求。
酶储存溶液：20 mM Tris-HCl(pH 8.0), 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 100 mM KCl, 0.5% (v/v) Nonidet P40, 0.5% (v/v)
Tween 20 and 50% (v/v) glycerol。
10X PCR Buffer(with Mg2+)：100 mM Tris-HCl(pH 8.8 at 25℃), 500 mM KCl, 15mM MgCl2, 0.8% (v/v) Nonidet
P40。
失活或抑制：酚氯仿抽提可以使Taq酶失活，加入脱氧胆酸钠至0.06%，SDS至0.01%，或sarkosyl至0.02%均可以抑制Taq酶。
试剂盒带有dNTP，该dNTP为dATP、dCTP、dGTP和dTTP的混合物，每种的浓度均为2.5mM。
本试剂盒用于50微升的PCR反应体系，足够用于160个反应，用于20微升的PCR反应体系，足够用于400个反应。
使用说明：
1.PCR反应体系的设置：
a.溶解并混匀PCR反应所需的各种溶液。将Taq DNA Polymerase置于冰浴上或冰盒内。
b.参考下表在冰浴上设置PCR反应(如果有多个类似的PCR反应，可以先配制大体积的包含水、buffer、dNTP和Taq酶的混合物，然后分装到各PCR反应管内。根据情况，有时混合物中可以包括引物)：
| 试剂 | 最终浓度 | 体积 | 体积 |
| 双蒸水或Milli-Q水 | - | (36.75-x)μl | (14.7-y)μl |
| 10X PCR Buffer (with Mg2+) | 1X | 5μl | 2μl |
| dNTP (2.5mM each) | 0.2mM each | 4μl | 1.6μl |
| 模板DNA | 10pg-1μg* | xμl | yμl |
| 引物混合物(10μMeach) | 0.8μM | 4μl | 1.6μl |
| Taq DNA Polymerase (5U/μl) | 1.25U/50μl | 0.25μl | 0.1μl |
| 总体积 | - | 50μl | 20μl |
对于不同类型的模板在50μl反应体积中推荐用量如下：
哺乳动物基因组DNA：0.1-1μg；大肠杆菌基因组DNA：10-100ng；质粒DNA：0.1-10ng。
过多的模板DNA容易导致非特异性的PCR产物。
c.用移液器轻轻吹打混匀或轻微Vortex混匀，室温离心数秒，使液体积聚于管底。
d.如果所使用的PCR仪有热盖则省略本步骤。如果PCR仪没有热盖，则在管内滴入一滴矿物油(mineral oil，ST275)。
e.各设置好的PCR反应管置于PCR仪上，开始PCR反应。
2.PCR反应参数的设置可以参考如下示例：
STEP1(起始变性): 94℃ 3min
STEP2(变性): 94℃ 30sec
STEP3(退火): 55℃ 30sec
STEP4(延伸): 72℃ 1min
STEP5(循环): Go To STEP2 for 30 cycles
STEP6(最终延伸): 72℃ 10min
STEP7(临时保存): 4℃ forever
a.PCR反应的设置需根据模板、引物、PCR产物的长度和GC含量等条件的不同设定不同的PCR反应条件包括温度、时间和循环数等。
保存条件：
-20℃保存。
注意事项：
由于PCR反应非常灵敏可以扩增目的基因序列超过1000万倍，在使用Taq酶时请注意避免微量待扩增DNA的污染，并尽量考虑设置不加模板的空白对照以确认是否有待扩增DNA的污染。
Taq DNA polymerase在PCR过程中每循环的出错几率约为2.2×10-5，对于大于1kb的DNA片段的克隆推荐使用出错几率更低的DNA聚合酶，例如Pfu DNA polymerase、BeyoTaq DNA polymerase等。对于普通的PCR或RT-PCR定性检测或定量检测，Taq DNA polymerase是最佳选择。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
b.STEP4(延伸)的时间设置需根据PCR产物的长度进行设置，通常每kb产物的延伸时间为1分钟。例如PCR产物的长度为1kb，则延伸时间可以设置为1分钟，PCR产物的长度为2kb，则延伸时间可以设置为2分钟，以此类推。
c.对于初次进行的PCR，为尽量确保可以扩增出预期的PCR产物，可以把循环数设置为35。对于需进行半定量或定量的PCR反应循环数一定要进行适当优化，使PCR反应没有达到平台期。
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