产品名称：核酸相关>反转录与PCR>PCR相关（PCR试剂盒）PCR Kit with
本PCR试剂盒 DNA Polymerase、PCR buffer、dNTP和上样缓冲液，自备模板和引物即可进行PCR反应，适合用于各种常规PCR以及T载体克隆、点突变等，能在高效扩增DNA模板的情况下同时保证高保真性。
DNA Polymerase简称酶，是一种兼顾了高保真性和高扩增效率的DNA聚合酶。
酶可以催化5’至3’方向的依赖于DNA模板的脱氧核苷酸的聚合。同时酶有3’至5’的外切酶活性(proofreading activity)。另外，酶有5’至3’外切酶活性，但酶没有反转录酶活性。
由于酶有3’至5’的外切酶活性，因此在PCR扩增过程中出错的几率大大降低，出错率为1.6×10-6-6 per nt per cycle，略低于Pfu酶的2.6×10-6 per nt per cycle。
酶的DNA扩增效率大大高于Pfu酶，和Taq酶的扩增效率比较接近，很好地兼顾了扩增效率和扩增的准确性。
用途：高保真PCR (high fidelity PCR)、点突变、T载体克隆等各种常规PCR反应。
用酶扩增产生的PCR产物带有3’-dA overhangs，可以用于基于T载体的PCR片段克隆。
酶可以扩增长度达5kb的DNA片段，最长可以扩增长达10kb的DNA片段。通常适合扩增3kb以下的DNA片段。
活性定义：One unit of the enzyme catalyzes the incorporation of 10 nmol of deoxyribonucleotides into
a polynucleotide fraction (adsorbed on DE-81) in 30 min at 72℃. Enzyme activity is assayed in the following mixture: 20 mM Tris-HCl (pH 8.8 at 25℃), 2 mM MgSO4, 10 mM (NH4)2SO4, 10 mM KCl, 0.1% (v/v) Triton X-100, 0.1 mg/ml BSA, 0.75 mM activated calf thymus DNA, 0.2 mM of each dNTP, 0.4 MBq/ml [3H]-dTTP.
纯度：不含DNA内切酶、外切酶和磷酸酯酶，不含RNA酶，满足常规PCR反应要求。
酶储存溶液：20 mM Tris-HCl (pH 8.0), 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 100 mM KCl, 0.1% (v/v) Nonidet P40, 0.1% (v/v)
Tween 20 and 50% (v/v)glycerol。
10X Buffer (with Mg2+)：200 mM Tris-HCl (pH 8.8 at 25℃), 100 mM (NH4)2SO4, 100 mM KCl, 20mM
MgSO4, 1% (v/v) Triton X-100, 1 mg/ml BSA。
失活或抑制：酚氯仿抽提可以使酶失活。
试剂盒带有dNTP，该dNTP为dATP、dCTP、dGTP和dTTP的混合物，每种的浓度均为2.5mM。
本试剂盒用于50微升的PCR反应体系，足够用于160个反应，用于20微升的PCR反应体系，足够用于400个反应。
使用说明：
保存条件：
-20℃保存。
注意事项：
由于PCR反应非常灵敏可以扩增目的基因序列超过1000万倍，在使用酶时请注意避免微量待扩增DNA的污染，并尽量考虑设置不加模板的空白对照以确认是否有待扩增DNA的污染。
酶有3’至5’的外切酶活性，无dNTP时可以降解引物。因此酶一定要最后加入，并且要在冰浴上操作。
不能使用Taq酶的PCR Buffer来替代Pfu酶的PCR Buffer。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
上海化科实验器材有限公司主要生产经营：实验室器材，玻璃仪器，实验室耗材，生物耗材，化学试剂，微生物试剂，样品瓶，包装瓶，实验室设备，仪器仪表等。
广泛服务于：科研，制药，生物，生命科学，教育，污水处理，食品与饮料，电子，轻工业，矿业，石油天然气，石油化学工业，工业品仪器，环保工程等行业。
公司网站：http://www.shhk.com.cn
订单邮箱：sales@shhk.com.cn（推荐）
咨询电话：021-67652117，57602161
QQ 在线：1152028600。
本PCR试剂盒 DNA Polymerase、PCR buffer、dNTP和上样缓冲液，自备模板和引物即可进行PCR反应，适合用于各种常规PCR以及T载体克隆、点突变等，能在高效扩增DNA模板的情况下同时保证高保真性。
DNA Polymerase简称酶，是一种兼顾了高保真性和高扩增效率的DNA聚合酶。
酶可以催化5’至3’方向的依赖于DNA模板的脱氧核苷酸的聚合。同时酶有3’至5’的外切酶活性(proofreading activity)。另外，酶有5’至3’外切酶活性，但酶没有反转录酶活性。
由于酶有3’至5’的外切酶活性，因此在PCR扩增过程中出错的几率大大降低，出错率为1.6×10-6-6 per nt per cycle，略低于Pfu酶的2.6×10-6 per nt per cycle。
酶的DNA扩增效率大大高于Pfu酶，和Taq酶的扩增效率比较接近，很好地兼顾了扩增效率和扩增的准确性。
用途：高保真PCR (high fidelity PCR)、点突变、T载体克隆等各种常规PCR反应。
用酶扩增产生的PCR产物带有3’-dA overhangs，可以用于基于T载体的PCR片段克隆。
酶可以扩增长度达5kb的DNA片段，最长可以扩增长达10kb的DNA片段。通常适合扩增3kb以下的DNA片段。
活性定义：One unit of the enzyme catalyzes the incorporation of 10 nmol of deoxyribonucleotides into
a polynucleotide fraction (adsorbed on DE-81) in 30 min at 72℃. Enzyme activity is assayed in the following mixture: 20 mM Tris-HCl (pH 8.8 at 25℃), 2 mM MgSO4, 10 mM (NH4)2SO4, 10 mM KCl, 0.1% (v/v) Triton X-100, 0.1 mg/ml BSA, 0.75 mM activated calf thymus DNA, 0.2 mM of each dNTP, 0.4 MBq/ml [3H]-dTTP.
纯度：不含DNA内切酶、外切酶和磷酸酯酶，不含RNA酶，满足常规PCR反应要求。
酶储存溶液：20 mM Tris-HCl (pH 8.0), 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 100 mM KCl, 0.1% (v/v) Nonidet P40, 0.1% (v/v)
Tween 20 and 50% (v/v)glycerol。
10X Buffer (with Mg2+)：200 mM Tris-HCl (pH 8.8 at 25℃), 100 mM (NH4)2SO4, 100 mM KCl, 20mM
MgSO4, 1% (v/v) Triton X-100, 1 mg/ml BSA。
失活或抑制：酚氯仿抽提可以使酶失活。
试剂盒带有dNTP，该dNTP为dATP、dCTP、dGTP和dTTP的混合物，每种的浓度均为2.5mM。
本试剂盒用于50微升的PCR反应体系，足够用于160个反应，用于20微升的PCR反应体系，足够用于400个反应。
使用说明：
- 1.PCR反应体系的设置：
- a.溶解并混匀PCR反应所需的各种溶液。将 DNA Polymerase置于冰浴上或冰盒内。
- b.参考下表在冰浴上设置PCR反应(如果有多个类似的PCR反应，可以先配制大体积的包含水、buffer、dNTP和酶的混合物，然后分装到各PCR反应管内。根据情况，有时混合物中可以包括引物)：
-
试剂 最终浓度 体积 体积 双蒸水或Milli-Q水 - (36.75-x)μl (14.7-y)μl 10X Buffer (with Mg2+) 1X 5μl 2μl dNTP (2.5mM each) 0.2mM each 4μl 1.6μl 模板DNA 10pg-1μg* xμl yμl 引物混合物(10μM each) 0.8μM 4μl 1.6μl DNA Polymerase (5U/μl) 1.25U/50μl 0.25μl 0.1μl 总体积 - 50μl 20μl - 对于不同类型的模板在50μl反应体积中推荐用量如下：哺乳动物基因组DNA：0.1-1μg；大肠杆菌基因组DNA：10-100ng；质粒DNA：0.1-10ng。过多的模板DNA容易导致非特异性的PCR产物。
- c.用移液器轻轻吹打混匀或轻微Vortex混匀，室温离心数秒，使液体积聚于管底。
- d.如果所使用的PCR仪有热盖则省略本步骤。如果PCR仪没有热盖，则在管内滴入一滴矿物油(mineral oil，ST275)。
- e.各设置好的PCR反应管置于PCR仪上，开始PCR反应。
- 2.PCR反应参数的设置可以参考如下示例：
- STEP1(起始变性): 94℃ 3min
- STEP2(变性): 94℃ 30sec
- STEP3(退火): 55℃ 30sec
- STEP4(延伸): 72℃ 2min
- STEP5(循环): Go To STEP2 for 30 cycles
- STEP6(最终延伸): 72℃ 10min
- STEP7(临时保存): 4℃ forever
- a.PCR反应的设置需根据模板、引物、PCR产物的长度和GC含量等条件的不同设定不同的PCR反应条件包括温度、时间和循环数等。
- b.STEP4(延伸)的时间设置需根据PCR产物的长度进行设置，通常每kb产物的延伸时间为1.5分钟。例如PCR产物的长度为1kb，则延伸时间可以设置为1.5分钟，PCR产物的长度为2kb，则延伸时间可以设置为3分钟，以此类推。
- c.对于初次进行的PCR，为尽量确保可以扩增出预期的PCR产物，可以把循环数设置为35。对于需进行半定量或定量的PCR反应循环数一定要进行适当优化，使PCR反应没有达到平台期。
-20℃保存。
注意事项：
由于PCR反应非常灵敏可以扩增目的基因序列超过1000万倍，在使用酶时请注意避免微量待扩增DNA的污染，并尽量考虑设置不加模板的空白对照以确认是否有待扩增DNA的污染。
酶有3’至5’的外切酶活性，无dNTP时可以降解引物。因此酶一定要最后加入，并且要在冰浴上操作。
不能使用Taq酶的PCR Buffer来替代Pfu酶的PCR Buffer。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
上海化科实验器材有限公司主要生产经营：实验室器材，玻璃仪器，实验室耗材，生物耗材，化学试剂，微生物试剂，样品瓶，包装瓶，实验室设备，仪器仪表等。
广泛服务于：科研，制药，生物，生命科学，教育，污水处理，食品与饮料，电子，轻工业，矿业，石油天然气，石油化学工业，工业品仪器，环保工程等行业。
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咨询电话：021-67652117，57602161
QQ 在线：1152028600。
